国家开放大学《兽医公共卫生概论》实验报告1答案

兽医公共卫生概论实验报告
任选两个实验，按实验的具体要求，提交实验报告
《兽医公共卫生概论》实验报告（一）
实验三 蚊虫携带病原体的监测
一、实验目的
通过蚊虫病原学监测，掌握本地区蚊传病原的传播媒介及其时空分布，为蚊媒传染病的风险评估、预测预警和控制提供科学依据。
二、实验器材
监测对象：蚊子。
主要仪器：诱蚊灯、体视显微镜、PCR仪、收集容器、单道（或多道）微量移液器（2.5μL、10 μL、20μL、50μL、100μL、200μL和1000μL）。
主要试剂与材料：TRIzol试剂或其他商品化核酸提取试剂盒、商品化RT-PCR和PCR通用试剂、冻存管、PCR反应管、离心管、无核酸酶移液器吸头（10μL、200μL和1000μL）、实验记录表格。检测蚊媒病原体的引物参照表1中的有关标准进行合成。
三、实验步骤
确定监测区域：根据疾病疫情流行情况以及蚊媒分布情况，确定蚊媒监测的区域范围。该区域应涵盖可能存在疾病传播风险的地区。
设立监测站点：根据监测区域的大小和特点，合理确定监测站点的位置和数量。选择在居民区、公园、医院及畜禽养殖场周边设置监测点。
确定监测指标：根据疾病防控的需要，确定监测的蚊种和病原体。监测指标包括蚊虫总数、蚊虫种类、密度以及携带病原体情况等。
确定监测时间：每年4～10月，每月上下旬各监测1次，相邻2次的监测时间间隔不少于10天。
采集蚊虫样本：采用诱蚊灯法采集蚊虫样本。每处监测点放置6台诱蚊灯，诱蚊灯放置在远离干扰光源和避风的区域。诱蚊灯光源离地1.5m，日落前1h接通电源，开启诱蚊灯诱捕蚊虫，直至次日日出后1h，密闭收集器后，再关闭电源，将集蚊袋取出。
鉴定蚊虫分类：将采集到的蚊虫样本置于干冰上进行计数、性别与种类鉴定。借助体视显微镜观察虫体，主要观察虫体头、胸、腹、背面、翅脉、足、口器等形态学特征，参考《中国重要医学昆虫分类与鉴别》对蚊虫进行性别与种类鉴定和计数。将同一种类的雌蚊按照每50 只为1个样品池装入冻存管里，标记编号，同时在采样记录表上录入标本采集背景信息。
分装后的蚊虫冻存管放入液氮罐中保存。
密度计算：密度计算公式为
提取样本处理与核酸：取出冻存的蚊虫样本，倒入研磨器中，加入2mL灭菌PBS充分研磨，4℃12000r/min 离心5min，将上清液以250μL/份分装后，冻存于–80℃备用。采用TRIzol 或其他商品化核酸提取试剂盒提取样本的DNA或RNA。
检测病原体核酸：利用RT-PCR或PCR检测每份样本中是否存在日本脑炎病毒、登革病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、盖塔病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、疟原虫的核酸。主要蚊媒病原体核酸检测所依据的标准见表1。
表1 蚊媒病原体核酸检测所依据的标准
病原名称
标准名称
标准号
日本脑炎病毒 日本乙型脑炎检疫技术规范
SN/T 2472-2010
登革病毒
登革热诊断
WS216-2018
西尼罗病毒 西尼罗病毒病检测方法
GB/T 27518-2011
寨卡病毒
国境口岸寨卡病毒病防控技术规范 第3部分：
实验室检测
SN/T 4652.3-2016
盖塔病毒
动物盖塔病毒感染诊断技术
NY/T 4303-2023
黄热病毒
交叉引物恒温扩增检测方法 第4部分：黄热病
毒
SN/T 3567.4-2015
基孔肯雅病毒 基孔肯雅热诊断
WS/T 590-2018
疟原虫
四、实验报告
疟原虫核酸检测 多重PCR法
T/SPMA004-2023
对监测数据进行统计与分析，形成蚊虫携带病原体的监测报告，为政府和相关机构提供决策参考，以便及时调整监测策略和采取相应的防控措施。例如，加强蚊虫灭蚊和清除孳生地，推广个人防护，加强疫情监测和报告等。